Как да извършите серийни разреждания

Съдържание

• етапи
• Метод 1 Извършете просто разреждане
• Метод 2 Изчислява се крайния коефициент на разреждане и концентрация

В химията разреждането се състои в намаляване на концентрацията на даден разтвор. Серийното разреждане е просто многократно разреждане на оригинален разтвор за бързо усилване на коефициента на разреждане. Този вид разреждане често се провежда по време на експерименти, изискващи силно разредени разтвори и висока точност, като например тези, включващи криви на концентрация в лог скала или такива, които позволяват да се изчисли плътността на бактериите в определени среди. Много често се изпълняват в биохимия, микробиология, фармакология или химия.

етапи

Метод 1 Извършете просто разреждане

1. 
   

   
   Определете правилната течност за разреждане (или разредител). Изборът на разредител е много важен и зависи от разтвора, който искате да разредите. Разредителят често е дестилирана вода, но не е систематичен. По този начин, с разтвор, съдържащ бактерии или клетки, вместо това се използва културална среда. За серийно разреждане се използва един и същ разредител във всички епруветки.
   • Ако не сте сигурни кой разредител да използвате, потърсете помощ от компетентен човек или потърсете в Интернет какво трябва да направят хората за подобно преживяване.

2. 
   

   
   Пригответе няколко епруветки, съдържащи 9 ml течност за разреждане. Тези епруветки ще бъдат използвани за извършване на последователни разреждания. Принципът е прост, ще вземете проба от изходния разтвор и ще го прехвърлите в следващата тръба, след това вземете проба от тази тръба, за да я поставите в следващата и т.н.
   • Преди започване на разрежданията е препоръчително предварително да се идентифицират епруветките, за да се избегне объркване по-късно.
   • Във всяка епруветка ще имате концентрация десет по-ниска, отколкото в предишната. Първата епруветка ще съдържа разреден разтвор в десетата, втората, стотната, третата, хилядната част и т.н. Определете предварително броя на разрежданията, за да избегнете създаването на повече епруветки от необходимото и разтворителя ненужно.

3. 
   

   
   
   
   Пригответе епруветка с разтвора на майка си. Сложете най-малко 2 мл. Минималното количество основен разтвор за серийно разреждане е един милилитър. Оставете 2 ml за възможно второ разреждане. Тази тръба с майчин разтвор, можете да я маркирате като „SM“.
   • Преди да започнете серийно разреждане, смесете добре изходния разтвор.

4. 
   

   
   Направете първото разреждане. Пипетирайте 1 ml от основния разтвор в епруветката с надпис "SM" и пренесете това количество в етикетната епруветка. 1/10 която вече съдържа 9 ml течност за разреждане. Смесете до получаване на хомогенен разтвор. В тази епруветка вече има 10 мл разтвор: 1 мл основен разтвор и 9 мл течност за разреждане. Това ново решение е десет пъти по-малко концентрирано от предишното.

5. 
   

   
   
   
   Извършете второто разреждане. Във второто серийно разреждане ще извлечете 1 ml от етикетирания разтвор на епруветката 1/10 и ще го излеете в епруветката 1/100 която вече съдържа 9 ml течност за разреждане. Тръбата 1/10 ще бъдат добре смесени преди вземане на проби. След като прехвърлянето приключи, смесете добре тръбата 1/100, Разтворът от маркираната епруветка 1/10 е 10 пъти по-концентрирана от тази на белязаната тръба 1/100.

6. 
   

   
   Повторете тази манипулация, ако е необходимо. Тази процедура може да се повтори толкова пъти, колкото е необходимо, докато се постигне желаното разреждане. По този начин за експеримент, включващ криви на концентрация, можете да получите поредица от разтвори с разреждания към единицата, десетата (1/10), стота (1/100) или хилядната (1/1000).

Метод 2 Изчислява се крайния коефициент на разреждане и концентрация

1. 
   

   
   Изчислете съотношение окончателното разреждане след серийно разреждане. Общото съотношение на разреждане се получава чрез умножаване на коефициента на разреждане върху себе си толкова пъти, колкото има разреждания. Математически формулата е следната: D_т = D₁ x D₂ x D₃ х ... х Г_пс D_т представляващ общия коефициент на разреждане и D_п, съотношението на разреждането.
   • Така че, нека приемем, че извършвате 1/10 разреждане на течност 4 пъти подред. Във формулата заменете коефициента на разреждане с неговата стойност: D_т = 10 х 10 х 10 х 10 = 10 000
   • Крайният коефициент на разреждане на четвъртата епруветка при вашето серийно разреждане е 1/10 000. Концентрацията на разтвора на последната епруветка вече е 10 000 пъти по-ниска от тази на първоначалния разтвор.

2. 
   

   
   Определете концентрацията на разтвор след разреждане. За да намерите крайната концентрация на разтвор след серийно разреждане, трябва да знаете началната концентрация. Тогава формулата е: C_{окончателен} = С_{първоначален}/ Aс C_{окончателен} представляваща крайната концентрация на разредения разтвор, C_{първоначален}, концентрацията на основния разтвор и D, съотношението на разреждането, определено предварително.
   • И така, ако разреждате клетъчен разтвор с концентрация 1 000 000 клетки на ml и съотношението ви за разреждане е настроено на 1000, каква ще бъде крайната концентрация на разредената ви проба?
   • Използвайте формулата:
     • C_{окончателен} = С_{първоначален}/ A
     • C_{окончателен} = 1 000 000/1 000
     • C_{окончателен} = 1000 клетки / мл

3. 
   

   
   Обърнете внимание на използваните единици. Когато правите изчисленията си, винаги проверявайте дали използвате едни и същи единици. По този начин, ако започнете от концентрация на клетки на ml, вашият краен резултат също ще бъде в клетки на ml. Ако началната ви концентрация е в части на милион (ppm), крайната ви концентрация ще бъде в части на милион.